ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Гель-проникающая хроматография ассоциирующихся систем из "Хроматография полимеров" Очевидно, если белок вводить в хроматографическую колонку в виде узкой зоны, она будет со временем размываться, концентрация внутри нее уменьшаться и вследствие нелинейности уравнений (1У.60) доля неассоциированных молекул белка в зоне будет расти, а скорость движения зоны падать, т. е. узкая зона с ассоциирующимися белковыми молекулами при хроматографировании движется с переменной, постепенно понижающейся скоростью [89]. Это создает дополнительные трудности при интерпретации получающихся результатов. Поэтому в хроматографических экспериментах с ассоциирующимися белковыми молекулами предпочтительнее работать с широкими ступенчатыми зонами, размывание которых не оказывает влияния на концентрацию в них белка и сказывается главным образом лишь на форме переднего и заднего фронтов зоны. При этом за движением зоны удобно следить, наблюдая перемещение ее переднего и заднего центроидов (центров масс) [89]. [c.177] На рис. 1У.30 и 1У.31 показаны подобные хроматограммы ассоциирующихся белков и дифференциальные преобразования, которые используют для их интерпретации. [c.177] Для интерпретации получаемых результатов, в частности для отыскания константы ассоциации, также можно воспользоваться аналитическими выражениями статистических моментов. [c.177] С помощью методики, аналогичной той, которая применялась в разделе IV.7.1 при изучении изомеризующихся систем, на основании выражений (IV.63) можно определять константы ki и к , характеризующие скорости реакций ассоциации и диссоциации. [c.178] Уравнение (1У.74) можно рассматривать как связь концентрации мономера Су с удерживаемым объемом Vц. [c.180] Возможен также другой подход к данной проблеме. Он базируется на решении системы уравнений (IV. 60) численным методом с помощью электронно-вычислительных машин [96—98]. Здесь, перебирая возможные значения констант ассоциации /с,-, можно находить соответствующие им численные решения системы (IV. 60) при разных начальных условиях. [c.181] с одной стороны, позволяет выяснить закономерности процесса, а с другой, сравнивая полученные таким образом решения системы (IV.60) с экспериментальными хроматограммами, — определять константы ассоциации /с,-. [c.181] С помощью стационарного эксперимента можно определить и число ассоциатов в белковом растворе. Для этого надо последовательно апробировать систему (IV.80) в предположении, что Б растворе имеются только мономеры и димеры мономеры, димеры и тримеры и т. д. Идентичность констант, найденных из этих систем для различных групп опытов, позволит выбрать правильный вариант. [c.183] Следует отметить, что система уравнений (IV.58), как и уравнение (IV.83), обобщается па случай присутствия в растворе любого конечного числа т ассоциатов. При этом можно получить аналитические выражения для статистических моментов хроматографических распределений и с их помощью рассчитать кинетические константы ki (i = 1, 2,. . . т). [c.183] Зная константы ассоциации и количественный состав белковой смеси из хроматографического эксперимента нетрудно найти молекулярную массу белка, используя одну из ранее упоминавшихся калибровочных зависимостей. [c.183] Вернуться к основной статье