ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Метилирование полисахаридов гемицеллюлоз и установление состава гидролизатов из "Гемицеллюлозы" Одним из наиболее информативных методов установления строения полисахаридов является метилирование. Его основы и различные модификации рассмотрены в монографии Н. К. Кочеткова и соавт. и в ряде методических пособий [68, 77, 78]. Сущность метода сводится к преобразованию свободных гидроксильных групп иолисахаридов в мМоксильиые, устойчивые к воздействию кислот, последующей деструкции модифицированного биополимера до мономеров и их дальнейшей идентификации. Образующиеся ири гидролизе метилированного полисахарида метиловые эфиры простых сахаров содержат свободные гидроксильные группы, по положению которых судят о размерах окнсных циклов мо-носахаридных звеньев и местах присоединения мономерных, остатков друг к другу в молекуле исходного соединения. [c.61] Классическим вариантом метилирования является метод Хеуорса, заключающийся в обработке полисахарида диметилсульфа-том в водном растворе гидроксида натрия. Уже одноразовое метилирование позволяет ввести в молекулу полисахарида значительное количество метильных групп. Однако дальнейшее метилирование протекает с трудом вследствие уменьшения растворимости частично метилированных иолисахаридов в водных растворах щелочей. Поэтому обработку полисахарида приходится повторять многократно. Существует несколько модификаций метода. В том числе используют обработку ацетилированиого либо частично метилированного полисахарида твердым гидроксидом натрия и ди-метилсульфатом в тетрагидрофуране. [c.61] Иногда полностью метилированный полисахарид получают, сочетая метилирование по Хеуорсу и ио Пурди. В этом случае иа. первом этапе получают в соответствии с методом Хеуорса частично метилированный полисахарид, который далее дометилируют,, используя метилйодид и оксид серебра. [c.61] Гидролиз осуществляют либо раствором серной кислоты, либо последовательно воздействуя на продукт концентрированной муравьиной кислотой (формолиз) и разбавленной серной. [c.62] Растворы метилированных моносахаридов фракционируют с помощью распределительной хроматографии на целлюлозе или силикагеле, адсорбционной хроматографии или, лучше, ГЖХ в виде летучих производных, например частично метилироваипых ацетатов альдитов. К достижениям последних лет, увеличивающим значение ГЖХ для структурного анализа иолисахаридов, относится прямое подключение газожидкостных хроматографов к масс-спектрометрам (хромато-масс-сиектрометрия). [c.62] Ниже в качестве примера, иллюстрирующего возможности метода метилирования, приводятся данные ио характеристике иоли-сахарида камбиальной ткани Вае1, полученные с его помощью [131]. [c.62] Полностью метилированный иолисахарид подвергали фор-молизу, а затем гидролизовали разбавленной серной кислотой. Далее метилированные моносахариды после их преобразования в ацетаты альдитов идентифицировали с помощью ГЖХ. Результаты анализа гидролизата представлены в табл. 2.1. [c.62] Обнаружение 2-0-метиларабинозы показывает, что этот моно сахарид также является точкой ветвления. Остатки глюкозы ири-сутствуют лишь в интерьерной, внутренней части молекулы, включаясь в нее (1— 2)-гликозидными связями, поскольку в гидролизате обнаруживается практически только 3, 4, 6-три-О-метилглю-коза. Остатки рамнозы локализованы внутри иолисахарида, также в качестве (1— -2)-связанных звеньев. [c.63] Таким образом, с помощью метода метилирования авторам удалось идентифицировать моносахариды, входящие в состав полисахарида, установить тины связей, посредством которых онг включены в макромолекулу. [c.64] Метод не дает информации о последовательности моносахарид-ных остатков в полисахариде, конфигурации гликозидных связей, а также в ряде случаев не позволяет установить размер окисно- го цикла. [c.64] Вернуться к основной статье