ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Выделение чистых культур бактерий из "Практикум по микробиологии" Чистой культурой бактерий называют культуру, полученную из одной клетки. Она необходима для изучения морфологических, физиологических особенностей организма и для установления видовой принадлежности (для таксономии). С этой целью сначала из различных мест обитания необходимо получить накопительную культуру, в которой преобладают представители данной группы микроорганизмов. Для этого создак т элективные (избирательные) условия среды, обеспечивающие преимущественное развитие выделяемых микроорганизмов. [c.78] Чистая культура из накопительной может быть получена ИЛ1И из одной клетки, или из отдельной колонии. В последнем случае из накопительной культуры или после ее разведения делают высев на плотную среду по методу Коха. [c.78] Образовавшуюся на плотной среде колонию считают развившейся из одной клетки. [c.78] При выделении чистых культур аэробных микроорганизмов высев из накопительной культуры проводят на поверхность Плотной среды. Нанесенную каплю накопительной культуры (или из соответствующего разведения ее) осторожно распределяют стерильным стеклянным шпателем по поверхности плотной среды, после чего этим же шпателем протирают поверхность среды последующих 3—4 чашек. [c.78] Чашки выдерживают от 2 до 7 суток, так как скорость роста различных микроорганизмов неодинакова. Выросшие изолированные колонии отсевают петлей в пробирки на поверхность скошенной плотной среды или в жидкую среду. [c.78] Высев из накопительной культуры микроорганизмов, относящихся к факультативным аэробам или факультативным анаэробам, для получения изолированных колоний проводят методом глубинного посева. [c.78] Выделение чистой культуры анаэробных микроорганизмов по методу Коха требует создания условий, ограничивающих доступ кислорода к культуре. [c.78] Выделение чистой культуры из одной клетки. Для получения чистой культуры из одной клетки можно использовать капельный метод Линднера, микроманипулятор или микроселектор Перфильева. [c.78] Капельный метод используют при работе с крупными микроорганизмами (дрожжи, плесневые грибы, водоросли). [c.79] Накопительную культуру разводят в стерильной среде с расчетом, чтобы в одной капле были единичные клетки Затем на поверхности стерильного покровного стекла готовят висячую каллю, нанося ее на стекло стальным пером, и микроскопируют ее. При этом отмечают висячую каплю, в которой обнаружена только одна клетка, и помещают ее в стерильную чашку Петри, на дне которой находится увлажненная фильтровальная бумага. После 12—24-часовой инкубации в термостате отмеченный препарат микроскопируют. Если в капле произошло размножение клетки, ее осторожно снимают с покровного стекла кусочком стерильной фильтровальной бумаги и переносят в пробирку со стерильной жидкой средой. [c.79] Для того чтобы изолировать одну клетку, небольшую каплю взвеси исследуемой культуры наносят на стерильное покровное стекло. Край капли устанавливают в середину поля зрения микроскопа и рядом с ней наносят нз пипетки каплю питательного раствора. Микропетлей набирают питательный раствор и подводят ее к капле с микроорганизмами, захватывают у края одну клетку, переносят в питательный растюр и выращивают чистую культуру. [c.79] Кроме указанных, разработаны и другие методы. Многие из них описаны в практическом руководстве под редакцией Н. А. Красильникова (Изд о МГУ, 1966). [c.80] Чистота культуры проверяется одновременно несколькими способами визуальным, микроскопировани-ем и высевом на питательных средах. [c.80] При визуальном контроле просматривается характер роста культуры на скошенном агаре. Если характер роста на поверхности скошенного агара однороден, то культура считается чистой. Есл штрих неоднороден, культура считается загрязненной. [c.80] При микроскопическом контроле выбирают колонию с однородным характером роста и изолированную от других колоний и готовят фиксированный и окрашенный препарат, который прооматр1ивается под микроскопом с иммерсионной системой. Если в препарате все клетки морфологически однородны, культура считается чистой. [c.80] Чистоту культуры проверяют также посевом на ряд питательных сред, в том числе на мясо- пептонный агар. Однородность характера роста колонии свидетельству- ет о чистоте выделенной культуры микроорганизмов. Набор сред определяется особенностями выделяемых микроорганизмов и их возможных спутников. [c.80] Материалы и оборудование. При постановке опыта свежие почвенные пробы в стерильных банках, проба навоза н навозной жижн, проба воды, часовые стекла, ложки алюминиевые чайные или шпатели, пинцеты, весы и разновесы, стеклянные или металлические бюксы, колбы емкостью 250 мл с 99 мл стерильной водопроводной воды, пробирки с 9 мл стерильной водопроводной воды, прибор для взбалтывания почвенных суспензий, стерильные пипетки Мора на 1 мл, пробирки со столбиком мясо-пет онного агара (% объема), стернальные чашки Петри, восковые карандаши, водлная баня, бумажные этикетки. [c.80] Вернуться к основной статье