ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Учет численности бактерий в почве из "Практикум по микробиологии" Почва обильно населена микроорганизмами и. служит основным поставщиком их во все другие естественные среды. [c.66] В связи с большой гетерогенностью состава почвы для учета численности микроорганизмов в ней с исследуемого участка берут среднюю почвенную пробу (стр. 146). Пробу берут стерильным буром, стерильной лопатой и стерильным ножом в заранее подготовленные стерильные полиэтиленовые, пергаментные мешки или в стерильные широкогорлые банки, закрывающиеся корковыми пробками, обернутыми ватой. Бур, лопату и нож стерилизуют (фламбированием) в поле перед взятием образца. Тщательно отмытые предметы обжигают горящим спиртом и неоднократно погружают в почву. На мешок или банку наклеивают этикетку с указанием места взятия образца, горизонта, даты. До анализа и между определениями пробы хранят в холодильнике. [c.66] Для этого на стерильное часовое стекло стерильным фарфоровым шпателем или алюминиевой чайной ложкой берут из банки навеску почвы 1 г. Предварительно почву в банке тщательно перемешивают. Ложку и часовое стекло обжигают в пламени горелки. Чтобы при взвешивании почвы в нее не попали из воздуха бактерии, часовое стекло накрывают другим часовым стеклом. [c.67] Навеску почвы, соблюдая условия асептики, переносят в колбу на 250 мл с 99 мл стерильной водопроводной воды. Смесь взбалтывают в течение 5 мин, не смачивая пробку. Стерильной пипеткой берут 1 мл суспензии, содержащей 10 г почвы, и перёносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды. Пипетку неоднократно промывают водой из пробирки, чтобы максимально смыть клетки со стенок пипетки, и отставляют. Другой стерильной пипеткой берут из колбы еще 1 мл суспензии и помещают во вторую колбу, тоже содержащую 99 мл стерильной водопроводной воды, пипетку так же промывают и отставляют. Пробирку и вторую колбу взбалтывают 1 мин. В пробирке в 1 мл концентрация 10 г, а во второй колбе—10 г. Точно так же переносят стерильными пипетками по 1 мл суспензии из второй колбы во вторую пробирку с 9 мл и в третью колбу с 99 мл стерильной водопроводной воды, готовят суспензии, содержащие соответственно в 1 мл 10 и 10 г почвы. [c.67] Для определения численности бактерий методом питательных пластин можно провести глубинный или поверхностный посев. Поверхностный посев более сложен и занимает больше времени. Поэтому для усвоения принципа подсчета численности бактерий методом питательных пластин на первых порах ограничимся проведением глубинного посева. Поверхностный посев будет использован при проведении общего микробиологического анализа почвы (глава X). [c.67] На крышке чашки восковым карандашом отмечают разведения. Затем в каждую чашку с суспензией вливают расплавленный столбик мясо-пептонного агара, заранее приготовленный и разлитый в пробирки (2/з объема их) из расчета один столбик на чашку. Температура расплавленного агара должна быть примерно 45°С. Ее устанавливают следующим образом пробирку с расплавленным агаром прикладывают к щеке, если щека выдерживает температуру, столбик агара можно вылить в чашку Петри, Осторожным круговым вращением чашки агар перемешивают с суспензией. Чашки с застывшим агаром переворачивают вверх дном (чтобы избежать попадания на поверхность агара конденсационной воды с крышки), и помещают в термостат при 28—30°С. [c.68] Клетки микроорганизмов, попав в питательную среду, начинают размножаться и образуют колонии, видимые невооруженным глазом. Через 48 ч инкубации чашки вынимают из термостата и в них подсчитывают число колоний. Окончательно подсчитывают колонии на 5-е сутки. [c.68] Чтобы подсчитать число бактерий в 1 г сырой почвы, число колоний на чашке умножают на степень разведения (число, показывающее, во сколько раз в каждом конкретном случае разбавили 1 г почвы). При умножении числа колоний на степень разведения во всех случаях, казалось бы, должно получиться примерно одинаковое число зародышей в 1 г почвы. Однако практически это не совсем так. [c.68] При методе питательных пластин возможен и неполный учет клеток в образце в связи с тем, что в одном месте на агаре может застыть не одна, а несколько клеток. Изолированные на агаре в одном месте клетки размножаются, их колонии сливаются, создавая впечатление только одной. [c.70] Частично можно внести поправку в счет колоний. Для этого из колонии с неоднородным характером роста готовят окрашенный препарат. Если под микроскопом обнаружатся разные формы (кокки, палочки, сардины), то вносят поправку и колонию считают не за одну, а за три. Если же все клетки одинаковые, то считают, что колония произошла от одной клетки, хотя в этом месте одинаковых клеток могло быть 5, 10 и больше. [c.70] Для сравнения численности бактерий в разных почвах необходимо подсчитать их количество на 1 г абсолютно сухой почвы. С этой целью одновременно со взятием навески почвы для приготовления разведений в отдельный металлический или стеклянный бюкс берут навеску почвы (5—10 г) для определения влажности ее. Сушат почву при 105°С до постоянной массы. Затем число клеток в 1 г сырой почвы надо разделить на на-, веску абсолютно сухой почвы, содержащейся в 1 г сырой почвы. [c.70] Таким образом, нами подсчитано, что в 1 г абсолютно сухой почвы содержится 8 тыс. клеток. [c.70] Вернуться к основной статье