ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Идентификация из "Аналитическая хроматография" Первый способ основан на введении в слой адсорбента флуоресцентных индикаторов (люминофоров), которые при облучении УФ-светом возбуждаются при такой длине волны, при которой детектируемые вещества поглощают. При этом они становятся хорошо видны в виде темных зон на светящемся фоне (зеленоватом) сорбента. Пластины с флуоресцентными индикаторами с , = 254 и 365 нм выпускают многие фирмы. Тот же принцип детектирования реализуют, опрыскивая пластины флуоресцирующими реагентами (водные растворы флуоресцеина натрия или родамина В, растворы морина в метаноле, 2 - 7 -дихлорфлуорес-цеина в этаноле). [c.363] Одним из наиболее чувствительных методов детектирования являётся способ, в котором собственную флуоресценцию наблюдают при облучении пластин УФ-светом с длиной волны, возбуждающей флуоресценцию данного соединения. [c.363] Имеются специальные средства, усиливающие флуоресценцию некоторых веществ. Многие вещества, не флуоресцирующие и не фосфоресцирующие в УФ-свете при комнатной температуре, становятся видимыми при температуре жидкого азота (на пластину наливают жидкий азот и освещают УФ-светом). Существует много химических реагентов, которые превращают нефлуоресцирующие вещества в флуоресцирующие при обработке до или после ТСХ. [c.364] При детектировании вторым способом в качестве универсальных реагентов используют концентрированные кислоты, в первую очередь — серную кислоту. После опрыскивания пластин некоторые соединения видны на холоду, многие проявляются после нагревания при разных температурах. Для обнаружения химически инертных соединений к серной кислоте добавляют 5% азотной кислоты или окислители (КМпО , К2СГ2О7). В качестве общих реагентов на органические соединения используют фосфорную, хлорную и другие кислоты. Широко применяют в ТСХ, как общий реагент, иод (пары, опрыскивание метанольным раствором иода). Описано много других общих реагентов, применяемых в ТСХ. [c.364] Многочисленную группу составляют специфические реагенты на индивидуальные соединения и отдельные классы соединений. Визуализацию веществ на тонкослойных хроматограммах проводят, опрыскивая пластину соответствующими реаг-ентами с дополнительной обработкой при необходимости (например, нагревание), выдерживая в парах реагентов, пропитывая пластину до или после ТСХ соответствующими реагентами. Особенностью ТСХ является возможность последовательного использования нескольких реагентов для детектирования разных классов соединений или соединений с разными функциональными группами. [c.364] при исследовании состава сложных смесей липидов на пластинах с силиказолевым связующим пластину последовательно опрыскивают нингидрином (липиды со свободной аминогруппой), молибдатным реактивом (главные фосфолипиды) с последующим нагреванием при 180°С (все присутствующие в смеси липиды), реактивом на основе малахитового зеленого (контроль результатов, полученных с помощью молибдатного реактива, и обнаружение фосфолипидов, присутствующих в очень малых количествах). Для опрыскивания пластин применяют пульверизаторы разной конструкции или продажные реагенты в аэрозольной упаковке. Точность количественных определений сильно зависит от качества и воспроизводимости детектирования, в особенности при опрыскивании хроматограмм. [c.364] Пост-хроматографическая дериватизация — это практически метод детектирования разделенных компонентов. Преимущество этого метода также в том, что дериватизация всех разделенных проб происходит одновременно, можно оптимально использовать кинетику реакций при различном уровне концентрации (скорость реакции мало зависит от концентрации вещества в растворе, так как дериватизация происходит на сухой пластине). Пост-хроматографическая дериватизация не влияет на хроматографическое разделение химически близких веществ. Оба метода имеют также и определенные ограничения. [c.365] Преимущество пост-хроматографической дериватизации в ТСХ по сравнению с ВЭЖХ — в значительно большей гибкости метода, позволяющего, например, за счет последующей пропитки пластин в специальных растворах значительно увеличить чувствительность флуоресценции. [c.365] В табл. IV.7 приведены некоторые реагенты для пред- и пост-хроматографической дериватизации разных классов соединений в ТСХ. [c.365] Кроме специальных химических реагентов, образующих флуоресцентные производные с исследуемыми соединениями, приведенных в табл. IV.7, в ТСХ используют пропитку пластин после ТСХ в различных растворах или выдерживание в парах каких-либо веществ для возбуждения или стабилизации флуоресценции, а также увеличения ее интенсивности. [c.365] Описан количественный анализ углеводов с использованием одиннадцати различных методов пост-хроматографической дериватизации при погружении пластин в соответствующие реагенты. При этом предел детектирования углеводов был понижен до 5—30 нг/пятно. [c.365] Одним из способов идентификации веществ в ТСХ является определение R разделенных соединений и сравнение их с R реперных образцов. Однако из-за плохой воспроизводимости условий при обычной ТСХ абсолютные значения R практически имеют мало смысла. Удобство ТСХ заключается в том, что всегда можно одновременно с исследуемой смесью хроматографировать и реперные образцы, сопоставляя таким образом их подвижности на одной пластинке в одинаковых условиях. В таком варианте идентификация при одномерной ТСХ облегчается. [c.367] Вернуться к основной статье