ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Разделение полимеров из "Аналитическая хроматография" Для хроматографии полимеров могут использоваться обычные нормально- или обращенно-фазовые, либо ионообменные процессы, основанные на связывании разделяемых молекул с поверхностью силами межмолекулярного взаимодействия. Примером такого подхода может служить обращенно-фазовая хроматография белков, позволяющая разделять компоненты, различающиеся балансом гидрофобных и гидрофильных свойств. Закономерности таких разновидностей хроматографии в общем напоминают наблюдаемые при разделении низкомолекулярных веществ. Главной- специфической особенностью является использование сорбентов с, большим средним диаметром пор — до 50 нм вместо 6—10 нм. В то же время упомянутые виды хроматографии малоселективны по отношению к родственным в химическом отношении полимерам, различающимся молекулярными массами. [c.332] Основное преимущество эксклюзионной хроматографии — возможность измерения молекулярно-массового распределения в широком диапазоне — от 10 до 10 дальтон без градиентного элюирования. При этом положение зон на хроматограмме предсказуемо в зависимости от молекулярной массы. [c.333] В упрощенном виде механизм эксклюзионной хроматографии может быть представлен следующим образом. Неподвижная фаза — пористый материал, причем средний размер пор сопоставим с размерами молекул разделяемых веществ. Молекулы смеси в колонке, заполненной таким материалом, будут вести себя по-разному, в зависимости от размеров. Наиболее крупные молекулы, не способные диффундировать внутрь пор неподвижной фазы, могут находиться только в пространстве между частицами и, следовательно, их удерживаемый объем будет равен объему колонки минус суммарный объем частиц неподвижной фазы (Ко). Молекулы, размеры которых меньше наиболее мелких пор сорбента, способны диффундировать внутрь частиц, поэтому удерживаются в колонке дольше, чем более крупные молекулы. Объем их элюирования равен полному объему растворителя в колонке, т. е. сумме объема пор и объема между частицами (К/). Молекулы промежуточных размеров, для которых доступна та или иная доля пор сорбента, будут выходить из колонки между объемами Уо и I//. Если ввести в колонку смесь веществ с известными и в достаточной степени различающимися молекулярными массами, из хроматограммы можно получить калибровочную кривую, подобную изображенной на рис. 111.40. Следовательно основная сфера применения эксклюзионной хроматографии — фракционирование смесей в соответствии с их молекулярными массами. Калибровочная кривая эксклюзионной хроматографии в своей средней части содержит линейный участок, в котором разделяющая способность колонки и точность измерений максимальны. Эта линейная часть обычно охватывает примерно два порядка молекулярных масс. Рабочий диапазон эксклюзионной колонки зависит от размера пор и смещается в область больших масс при увеличении среднего размера пор сорбента. Поэтому для работы в широком диапазоне масс обычно последовательно соединяют две или более колонок, различающихся по размеру пор. [c.333] Выбор растворителя определяется свойствами разделяемых веществ, характером сорбента и применяемым детектором. Используемые подвижные фазы должны хорощо растворять образец, смачивать сорбент и подавлять его остаточную адсорбционную способность. Для работы с органическими веществами чаще всего применяют тетрагидрофуран, хлороформ, диметилформамид. При работе с жесткими гелями бывает желательно добавлять в подвижную фазу этиленгликоль и полигликоли для подавления адсорбции. [c.335] Анализ биополимеров проводят, как правило, в водных средах [90]. Добавляемые модификаторы (соли, поверхностно-активные вещества, органические растворители) должны обеспечить блокирование всех побочных механизмов удерживания. [c.335] Реальные эксклюзионные хроматографы редко представляют собой такую закономерную последовательность пиков, как это изображено на рис. П1.40. Поэтому обработка их представляет определенные трудности и неосуществима с помощью обычных интеграторов. Наилучщие результаты дает обсчет эксклюзионных хроматограмм и расчет молекулярно-массовых распределений с помощью ЭВМ. При небольщом числе анализов можно использовать и ручной метод. [c.335] Эксклюзионную хроматографию можно также использовать для предварительного фракционирования сложных смесей, оценки содержания полимерных компонентов в смесях и мономеров — в полимерах. В отдельных случаях возможно также разделение смесей низкомолекулярных веществ. Детальный обзор практических аспектов эксклюзионной хроматографии дан в работе [21]. [c.335] Вернуться к основной статье