ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Другие методы из "Аналитическая химия Том 2" Значительные усовершенствования в 1980-х гг. [14.3-11] позволили преодолеть эти проблемы и окончательно привели к созданию коммерчески доступных приборов для ЖХ-ЯМР. [c.632] Движущей силой этих разработок был сбор ЯМР-спектров и проведение двумерных ЯМР-экспериментов с соединениями, разделенными с помощью жидкостной хроматографии в режиме on-line, а в идеале непосредственно в потоке или хотя бы в остановленном потоке. [c.632] Наиболее общими ядрами для прямого детектирования являются Н, и в то время как (из-за низкой чувствительности) для и более предпочтителен обращенный вариант с Н-детектированием. [c.633] Для преодоления упомянутых ограничений прибор для ЯМР должен быть существенно переделан и улучшен, чтобы его можно было ввести в проточные системы. Современный прибор для ЖХ-ЯМР изображен на рис. 14.3-10. Хроматографическая система состоит из ВЭЖХ-насоса, инжектора и аналитической колонки. Простой детектор (УФ или рефрактометрический) указывает на элюирование пика и обеспечивает получение количественной информации. Сигнал с этого детектора может быть также использован, чтобы остановить сбор данных или работу насоса, а также для сбора вещества, содержащегося в пике (либо немедленно в собирающую петлю перед детектором или после детектирования в коллекторе фракция). Хроматографический элюат направляется из ЖХ-ЯМР-интерфейса либо через проточную ячейку ЯМР-зонда, либо напрямую в слив. После прохождения через ячейку ЯМР поток идет к коллектору фракций для сбора и последующего исследования фракций, проанализированных ЯМР. [c.633] Обычно проточная ячейка имеет внутренний диаметр 2-4 мм (3-5 мм внешний диаметр) и рабочий объем около 60-250 мкл. Хотя, с хроматографической точки зрения диаметр проточной ячейки должен быть как можно меньше, чтобы предотвратить перемешивание элюента и размывание пиков (особенно для режима остановленного потока), 5-мм головка зонда наиболее подходит для ЖХ-ЯМР при 7Тл (300 МГц для Н). Головку зонда с внешним диаметром 4 мм можно считать резонным компромиссом между хорошей чувствительностью и малым перемешиванием элюента при работе с высокими частотами. Очевидно, что размер пробы, объем проточной ячейки и скорость потока должны подбираться так, чтобы достичь максимальной чувствительности. Головки с диаметром 3 мм наилучшим образом подходят для детектирования в режиме остановки потока при меньших объемах пиков, получаемых в микроколоночной ЖХ. [c.634] Проба должна провести в магнитном поле определенное время, при этом ядра поляризуются перед попаданием в проточную ячейку. Как результат ограниченного времени пребывания ядра в проточной ячейке по сравнению со статическими измерениями сокращаются времена спин-спиновой и спин-решеточной релаксации. Это приводит к возрастанию сигнала при увеличнии скорости потока. Этот эффект, однако, противоположен уширению спектральных линий при возрастании скорости потока, что требует нахождения компромиссных условий. [c.634] Следующая мера для достижения максимальной чувствительности - принимающая спираль должна быть прикреплена непосредственно к проточной ячейке. Это также обеспечивает высокую стабильность полученного сигнала. [c.634] Значительное усовершенствование было также сделано благодаря использованию аналого-цифровых преобразователей (АЦП) с высоким динамическим диапазоном (16-19 бит). Динамический диапазон АЦП определяет соотношение максимального и минимального детектируемых сигналов. Подавление сигнала растворителя также необходимо, чтобы извлечь пользу из высокого динамического диапазона АЦП. [c.635] Объединение этих особенностей обеспечивает в обычной конфигурации проточной системы для веществ с молекулярной массой 400 предел обнаружения около 10 мкг для и F (при 11,7 Тл, соответствующих 500 МГц для Н). Более высокая чувствительность может быть достигнута увеличением продолжительности сканирования в режиме остановки потока. В этом случае в течение 3 ч для и F может быть продетектировано 200 нг. Обращенная Н/ С-корреляция также требует сканирования в течение ночи, что позволяет достичь предела обнаружения около 15 мкг. Двумерные эксперименты проводятся с пробами 1 мкг в течение 3 ч. [c.635] Понятно, что при такой чувствительности использование ЖХ-ЯМР не подходит для эколого-аналитического контроля. Однако в промышленной и фармацевтической аналитической химии эта комбинация является многообещающим методом (рис. 14.3-11), и она будет иметь большое значение, если удастся улучшить чувствительность. [c.635] Для сочетания ТСХ с МС и ФПИК уже предложено несколько интерфейсов, но они не нашли широкого применения, возможно, из-за того, что простейший и практически самый дешевый метод в аналитической лаборатории сочетается с, пожалуй, наиболее сложными и дорогими методами детектирования. Однако разделяю1цую способность и универсальность современной высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ) трудно переоценить. [c.635] СФХ также успешно сочетается с масс-спектрометрическим, ФПИК и атомно-эмиссионным детектированием. Благодаря природе подвижной фазы, используемой в СФХ (обычно это сверхкритический диоксид углерода, часто с добавками небольших количеств модификатора, например, метанола), требования к интерфейсу являются промежуточными между требованиями в случае газовой и жидкостной хроматографии. Поэтому существующие ГХ- и ЖХ-интерфейсы могут быть приспособлены с небольшими изменениями для успешной работы с различными типами спектроскопических детекторов. [c.635] Заглядывая в будущее гибридных методов, нетрудно предсказать, что скорее всего появятся новые гибридные методы. Некоторые из них уже достигли определенной степени зрелости, такие как капиллярный электрофорез (КЭ) с ФПИК- и МС-детектированием. Другие из них пока что лишь на горизонте, например, ГХ с УФ-детектированием. Движущей силой таких разработок является потребность в высокочувствительных и специфичных детекторах для различных методов разделения, которые смогли бы решать все более сложные и комплексные аналитические задачи их успех в конечном итоге зависит именно от способности отвечать этим требованиям. [c.636] Вернуться к основной статье