ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Конъюгаты белков с полифункциональными полимерами-носителями из "Физиологические активные полимеры" Синтетические полифункциональные полимеры-носители не особенно часто используются для связывания белков из-за гидрофобности их главной полимерной цепи и отсутствия биодеструктируемости. В то же время важное преимущество таких лоли-меров заключается в том, что в большинстве случаев можно избежать сшивания макромолекул полимера-носителя при активации. [c.168] Свойства растворимых конъюгатов ферментов с полиэлектролитами зависят от свойств полимера-носителя и самого фермента [28]. Это связано с формированием микроокружения белковой глобулы, отличающегося от окружающей среды. Поэтому удачный выбор полиэлектролита позволяет получать стабильные конъюгаты с измененным рН-оптимумом (полианионы сдвигают его в щелочную область, а поликатионы — в кислую). Так, значительная стабилизация формиатдегидрогеназы была достигнута ковалентным связыванием фермента с водорастворимым частично кватернизованным сополимером 4-винилпиридина с акролеином [29]. Существенную роль при этом сыграли электростатические эффекты и способность полимера-носителя связывать ионы тяжелых металлов, защищая тем самым важные для проявления активности сульфгидрильные группы. [c.171] Свойства ферментов, связанных с полианионными носителями, зависят от характера носителя и условий получения конъюгата (количества конденсирующего агента, носителя и фермента). Так, при взаимодействии а-химотрипсина с полианионами (полиакриловой и поли-Ь-глутаминовой кислотами или карбоксиметилцеллюлозой) под действием реагента Вудворда К активность растворимого конъюгата возрастает с уменьшением количества конденсирующего реагента [31]. Поскольку при этом степень связывания фермента практически не уменьшается, то для достижения максимальной активности достаточно, по-видимому, одноточечного связывания образование же последующих связей снижает активность. [c.172] Конъюгат пепсина с растворимым сополимером этилена с малеиновым ангидридом оказался стабильным при хранении, несмотря на то, что белок был связан с полимером в 1—2 точках, в основном через е-аминогруппу единственного лизинового остатка [32]. К одной молекуле полимера, по-видимому, была присоединена только одна молекула фермента. При этом рН-профиль активности конъюгата был сдвинут на 1,5 ед. pH в щелочную область. Ферментативная активность конъюгата по отношению к высокомолекулярному субстрату (восстановленному молоку) была невелика — всего 8—14% от исходной в зависимости от pH, но термостабильность возросла в 2,5—5 раз. В то же время термостабильная кислая протеаза из РетсИИпит йиропЫ К 1014, связанная карбодиимидным методом с сополимером этилена с малеиновой кислотой (1 1), показала довольно высокую протеолитическую активность по отношению к казеину 34% от исходной при 30 °С и 70% при 75 °С. Следовательно, низкая активность полимер-ферментных конъюгатов, обусловленная стерическими препятствиями, не является их непременным свойством [33]. [c.172] Не только заряд, но и гидрофильно-липофильный баланс оказывает существенное влияние на свойства полимер-белковых конъюгатов. Так, получены конъюгаты ингибитора трипсина — каликреина (основа препарата Тразилол , применяемого в медицине) с производными поли-а,Р-аспарагиновой кислоты (5.12) —(5.14), имеющими одну и ту же структуру основной полимерной цепи и Mw = 31 тыс., но разные заместители в боковых группах [40]. [c.174] Отмечалось, что конъюгаты высокомолекулярного декстрана с -амилазой и каталазой слабее реагируют с антителами к исходному ферменту, чем сам нативный фермент, и их иммуногенность также уменьшается [54—56]. Аллергенный ответ на соответствующий конъюгат у морских свинок, сенсибилизированных а-амилазой, отсутствует, хотя оба конъюгата иммуногенны (но на низком уровне). [c.178] Конъюгат террилитина с диальдегиддекстраном [43] после восстановления борогидридом лишь немногим более стабилен к автолизу, чем нативный фермент, по-видимому, вследствие связывания белка с полимером-носителем в немногих точках. Перевод носителя в отрицательно заряженную форму с помощью бисульфита вызывает ускорение денатурации фермента в конъюгате и снижение его активности в щелочной области. Сродство восстановленного и отрицательно заряженного конъюгатов к ингибиторам сыворотки крови ниже, чем у исходного фермента, и определяется, видимо, стерическими факторами. [c.179] Выведение белков из циркуляции в кровяном русле (клиренс) происходит несколькими путями. Для низкомолекулярных белков — это гломерулярная фильтрация через почки, другой путь связан с расщеплением протеазами и, наконец, третий путь — эндоцитоз. Последний происходит в циркулирующих лейкоцитах и макрофагах, но наиболее важную роль в этом процессе играют клетки печени. [c.180] Таким образом, переход от нативных ферментов к их дек-страновым или другим полимерным конъюгатам позволяет увеличивать время сохранения ферментативной активности плазмы крови. Пока не ясно, какой из двух механизмов клиренса — гломерулярная фильтрация или захват клетками печени — участвует в наблюдаемых изменениях вполне возможно, что оба. Задача химика — найти такую структуру конъюгата, которая позволяла бы достаточно долго сохранять ферментативную активность циркулирующего фермента. [c.181] Вернуться к основной статье