ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Минимальная модель Na, К-АТфазы из "Биохимия мембран Кинетика мембранных транспортных ферментов" Прежде чем приступить к построению кинетической схемы фермента, необходимо обратить внимание на некоторые важные факты, которые требуется учитывать при создании модели. [c.96] К третьей группе относятся фосфорилированные формы фермента Е Р, которые отличаются от других АДФ-чувствительным дефосфорилированием. Показано, что в этой форме ионы N3+ окклюдированы. [c.97] К четвертой группе относятся фосфорилированные формы фермента Е2Р, которые характеризуются К+-чувствительным дефосфорилированием и высоким сродством к ионам К с внешней стороны. [c.97] Кроме вышеперечисленных форм фермента без всякого сомнения должна существовать свободная, не связанная с лигандами форма. Эта форма прямым способом не идентифицирована, но имеются веские, хотя и косвенные доказательства ее существования (J. Jensen et al., 1984). [c.98] Принципиальная схема работы Na, К-АТФазной системы должна объяснить четыре экспериментальных факта, которые касаются аномального трансмембранного действия катионов на процессы, индуцируемые катионами с противоположной стороны мембраны. [c.98] Все эти факты не нашли объяснения в литературе и, как правило, игнорируются при составлении моделей работы Na, К-АТФазной системы, так как они противоречат общепринятым свойствам Е Р- и г/ -форм. [c.98] Рассмотрим вначале малые концентрации субстрата 5 1 мЛ1 Этому случаю соответствует левая часть схемы 5, отдельно приведенная па схеме 6. [c.99] Значение этих параметров определяют экспериментально. Действительно, в специально поставленных экспериментах (см. рис. 24—27) было получено, что при 5=0,41 мМ, Л=0,39, Л1=0,09 Ях=3, а при Л1=0,09 мМ и различных значениях 5 и А—%=2. При малых значениях 5 и при М А Пу=0 и Ру=1. Кроме того, было сделано заключение, что при любых значениях 5, Л и Л1 можно считать Шх Ъ и Шу 1. [c.100] Исходя из этого материала, можно считать, что на схеме 6 изображена минимальная модель той части Na, К-АТФазной системы, которая работает при малых концентрациях субстрата. Она состоит из двух основных циклов. Назовем циклом ОРМ ту часть, в которой дефосфорилируется форма МЕР, а циклом OPA — форма АЕР. Допускается возможность существования третьего цикла ОРО, в котором происходит дефосфорилирование формы ОЕР. [c.100] Для завершения минимальной модели Na, К-АТФазной системы необходимо исследовать правую часть схемы 5, которая работает при больших концентрациях субстрата 5 1 мМ и образует два самостоятельных цикла. При избытке свободных ионов Mg2+ (М Л) получаем цикл SPM, а при малых концентрациях свободных лигандов (Л М О) — цикл SPO. [c.100] Здесь индекс I и открытый слева квадрат означают внутриклеточную ориентацию катионных участков системы, индекс о и открытый справа квадрат — внутриклеточную ориентацию, а индекс т и закрытый квадрат — окклюдированное состояние. На основе этой последовательности становится возможным отдельные ступени Ыа, К-АТФазного цикла объединить в единую логическую последовательность, используя для этого достоверные экспериментальные факты. Сетка правил, приведенная на схеме 8, позволяет составить с использованием минимальной модели принципиальную схему работы N3, К-АТФазной системы. [c.101] На заключительном этапе из схемы 7 можно получить полную кинетическую схему На, К-АТФазы, используя схему 8 и определяя состояние субъединиц димера, ориентацию их катионных участков и согласуя полученную последовательность с рядом экспериментально полученных условий, перечисленных выше. Однако здесь не приводятся эти рассуждения заинтересованный читатель может ознакомиться с обширным материалом по Ыа, К-АТФазе по специальным публикациям Авторы полагают, что приведенные выше этапы построения кинетической схемы Ыа, К-АТФазы хорошо иллюстрируют применение новых кинетических методов для анализа сложных кривых. [c.102] Вернуться к основной статье