ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Специальная часть Исследование азотистого обмена из "Практическая биохимия" Это исследование можно повести по трем направлениям 1) можно исследовать азотистые соединения в крови, 2) в моче и 3) можно иссЯедовать баланс азота. [c.120] Чаще всего имеет место первый случай. В крови можно исследовать белковый азот и его фракции или небелковый (остаточный) азот к его фракции. Последний исследуется очень часто, так как его определение в крови может служить диагностическим и прогностическим целям (например, при заболеваниях почек). [c.120] Для осаждения белков крови нужно реактивы 5 или 10%-ная трихлоруксусная кислота, фильтры посуда 1) пипетка на 10 мл с делениями в 0,1 мл 2) пипетка на 1 мл с делениями в 0,01 мл 3) стеклянная палочка 4) эрленмейеровские колбочки 5) воронки. [c.120] При малых количествах крови реактивы I) 10%-ная три.хлоруксусная кислота, 2) дистиллированная вода посуда 1) центрифужные пробирки 2) пипетки на 0,2 мл или на 1 мл с делениями в 0,01 мл 3) пипетка на 2 мл с делениями в 0,01 мл. [c.121] В центрифужную пробирку отмеривают 0,8 мл воды, затем туда же вливают 0,2 мл крови (плазмы) и несколько раз ополаскивают пипетку находящейся в пробирке водой. Затем к смеси в пробирке прибавляют 1,0 мл 10%-ной трнхлоруксус-ной кислоты, тщательно размешивают палочкой, дают постоять 10 минут и центрифугируют. Сливают отстой шариковой пипеткой в сухую пробирку. 1 мл = 0,1 мл крови. Так как осадок тяжелый и плотный, то часто можно слить отстой прямо через край пробирки, следя за тем, чтобы не захватились комочки осадка. [c.121] Посуда 1) три точные пипетки на 1 мл 2) пипетка на 10 мл с делениями в 0,1 мл 3) четыре эрленмейеровские колбочки на 100—175 мл 4) две воронки диаметром 7,5 см. [c.121] Реактивы — те же. Посуда 1) Точная пипетка на 0,2 мл (можно пользоваться и хорошей пипеткой на 1 мл с делениями на 0,01 мл, но при условии, что деления начинаются у конца пипетки, без неградуированного промежутка) 2) пипетка с делениями в 0,01. мл на 2. мл 3) пипетка с делениями в 0,01 мл на 1 мл 4) нумерованные центрифужные (попарно одинакового веса) пробирки 5) обыкновенные пробирки 6) шариковая пипетка. [c.122] В центрифужную пробирку налить 1,4 мл воды. Набрать в микропипетку 0,2 мл крови, выпустить ее в воду и несколько раз ополоснуть пипетку той же водой. Прибавить в смесь 0,2 мл раствора вольфрамата, перемешать, вращая пробирку между ладонями, прибавить 0,2 мл и. серной кислоты, все время встряхивая. Дать постоять 5—10—30 минут (как указано выше) и открутить на электрической центрифуге 3 минуты. Осторожно снять фильтрат шариковой пипеткой и слить в чистую сухую пробирку. В анализ идет 1,0 фильтрата = 0,1 крови. [c.122] Примечание. Метафосфорная кислота не только дает скоропортящиеся растворы, которые из-за этого приходится готовить в день применения, но и в твердом состоянии при неправильном хранении в незапарафиненной банке постепенно портится, переходя в ортофосфорную и теряя свои осаждающие свойства. Твердая хорошая метафосфорная кислота имеет вид леденца при постепенном поглощении влаги она становится шершавой и непрозрачной. Для исправления такой испорченной. кислоты ее складывают в прочную фарфоровую чашку и накаливают на сильном колбонагревателе, пока кислота не расплавится и из нее не выкипит вся вода. После этого ее нагревают еще 1 час, а затем сливают вязкую жидкость в другую, по воз.можности плоскую и широкую фарфоровую чашку, стоящую на толстой асбестовой подкладке (несколько слоев асбеста). [c.123] Кислота растекается по чашке и застывает тонким слоем. По охлаждении получается леденец , легко отделяющийся от чашки. Его разбивают на кусочки и хранят в банке с хорошо запарафинированной пробкой. При сплавлении кислоты, а также и при ее раскалывании нужно надевать очки, иначе могут пострадать глаза. [c.123] Можно приготовить аналогичным образом и метафосфат натрия. Для этого берут чистый одноосновный фосфат натрия и сплавляют его (как выше) в фарфоровой чашке до жидкого состояния, а затем прогревают еще 1 час, чтобы обеспечить полное удаление воды. Затем выливают в плоскую фарфоровую чашку. Из приготовленного метафосфата готовят 5%-ный раствор и работают, как указано ранее, или же 10%-ный раствор, подщелачивают его на фенолфталеин (как внешний индикатор) до pH 8—9 и пользуются им, как указано )анее. Для осаждения I г белка нужно 2 мл 10%-ного раствора, подкисленного I I или ледяной уксусной кислотой. [c.123] На 1 мл цельной крови берут 7 мл воды и по 1 мл обоих реактивов. На 1 мл сыворотки — 8 мл воды и по 0,5 мл обоих реактивов. [c.123] На 1 мл крови добавляют 8 мл раствора цинка и 1 мл щелочи. [c.124] Далее фильтрование или центрифугирование, смотря по количеству взятой крови. 1 мл фильтрата = 0,1 мл крови. [c.124] Посуда 1) пробирки обычные 2) пипетки на 0,25 мл плн на 1 мл с делениями в 0,01 мл 3) бюретка для щелочи 4) пипетка на 5 мл 5) воронки 6) къельдалевские колбы на 100 (или 50) мл. [c.124] К 5 мл раствора цинка в простой пробирке прибавляют 1 мл едкого натра. В смесь вдувают 0,25 мл крови и пипетку несколько раз ополаскивают смесью. Пробирку ставят в кипящую водяную баню на 3 минуты. Затем охлаждают и фильтруют прямо в къельдалевские колбы через складчатый фильтр или вату, хорошо промытую горячей водой (от аммиачных солей). Пробирку 2 раза ополаскивают, каждый раз 3 мл воды, и выливают на фильтр. Весь фильтрат = 0,25 мл крови. [c.124] Вернуться к основной статье