ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Определение редуцирующих веществ колориметрическим методом из "Химико-технический контроль гидролизных производств Издание 2" Метод предназначен для определения отдельных редуцирующих веществ (сахаров, уроновых кислот и др.) после их выделения из смеси хроматографированием на бумаге. [c.95] Метод основан на реакции редуцирующих веществ с анилинфталатом. После проявления хроматограмм окрашенные продукты реакции элюируют ледяной уксусной кислотой и растворы колориметрируют на колориметре ФЭК. Количество определяемого вещества находят по калибровочной кривой, составленной для этого вещества. [c.95] Аппаратура. Колориметр ФЭК или другой. [c.95] Реактивы и их приготовление. 1. Анилинфталат. Приготовление. 1,66 г фталевой кислоты и 1 мл свежеперегнанного анилина растворяют в бутаноле или этаноле, раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и объем доводят растворителем до метки. Приготовленный раствор хорошо перемешивают и хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой. 2. Уксусная кислота ледяная или сииртовый раствор соляной кислоты. Приготовление. Смешивают 29 мл 36%-ной соляной кислоты, 420 мл 95%-ного этилового спирта и 51 мл дистиллированной воды. 3. Глюкоза безводная (см. с. 36). [c.95] Построение калибровочной кривой. Готовят точно 1 %-ный раствор глюкозы (или другого вещества, которое хотят определять). Он содержит 10 мкг/мл или 100 мкг глюкозы в 0,01 мл. Из этого раствора разбавлением дистиллированной водой готовят растворы, которые в 0,01 мл содержат 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 и 10 мкг глюкозы. На ленту хроматографической бумаги в разные места наносят по 0,01 мл каждого приготовленного раствора. На другую ленту наносят разные количества 1%-ного раствора — 0,01 0,02 мл и т. д., которые соответственно содержат 100, 200 мкг и т. д. глюкозы. После высыхания пятен растворов на воздухе ленты на мгновение погружают в раствор анилинфталата, осушают между листов фильтровальной бумаги и кладут на ребро в сушильный шкаф. При температуре 100°С ленты выдерживают 10 мин. (Для других веществ время и температура проявления указаны в табл. 5.) Из лент вырезают окрашенные пятна, элюируют и определяют оптическую плотность элюата, как описано ниже. На основании полученных данных строят кривую зависимости оптической плотности (интенсивности окраски) элюата от количества глюкозы, взятой на реакцию с анилинфталатом, т. е. калибровочную кривую. [c.95] Подготовка проб. После хроматографирования проявляют одну хроматограмму, чтобы убедиться, что разделение закончено. [c.95] Ход анализа. Все высушенные хроматограммы проявляют анилинфталатом. Условия проявления хроматограмм зависят от природы определяемого вещества. При определении пентоз и уроновых кислот хроматограмму проявляют при температуре 70°С, при определении гексоз — при 100°С в течение 10 мин (см. табл. 5). Из приведенных хроматограмм вырезают кусочки с пятном интересующего вещества, каждый кусочек разрезают на мелкие тонкие полосочки, которые кладут в пробирку и заливают 8 мл ледяной уксусной кислоты или 8 мл спиртового раствора соляной кислоты. Элюирование ведут 1 ч при комнатной температуре. Через каждые 5—10 мин пробирки с кусочками хроматограмм энергично взбалтывают для ускорения элюации. Через 1 ч элюат осторожно сливают в подготовленную сухую пробирку и измеряют его оптическую плотность на фотоколориметре. Если пользуются фотоэлектроколориметром ФЭК-М, то интенсивность окраски измеряют в кювете шириной 10 мм. Светофильтр подбирают в зависимости от цвета анализируемого раствора, определяемого по табл. 17 (с. 294). [c.96] Минимальное определяемое количество вещества зависит от его природы. Для сахаров оно составляет 10 мкг. Редуцирующие вещества определяют с точностью 10—15% отн. [c.96] Предостережение. 1. Потери определяемого вещества обусловлены способом элюирования, который не гарантирует полноту извлечения окрашенного соединения из бумаги, особенно при большом количестве извлекаемого вещества. 2. Интенсивность окраски пятен на хроматограмме в значительной степени зависит от времени и температуры проявления хроматограмм. 3. Нельзя пользоваться калибровочной кривой, сделанной не для определяемого вещества. [c.96] Вернуться к основной статье