ПОИСК Статьи Рисунки Таблицы Факторы, способствующие появлению люминесцентного фона из "Фото-люминесценция растворов" Наложение рамановского испускания воды на спектр флуоресценции трех растворов бисульфата хинина, возбуждаемый линией ртути 366 нм, показано на рис. 144. При низкой чувствительности, используемой для записи спектра самого концентрированного раствора (кривая Б), максимум рассеянного света остается в пределах щкалы, и главная рамановская полоса образует лищь небольшой изгиб на кривой спектра флуоресценции. При увеличении чувствительности (для спектров более разбавленных растворов) рамановская полоса становится все более интенсивной (кривые В и Г). [c.393] Л —чистая вода при низкой чувствительности Б — бисульфат хинина в 0,1 н. серной кислоте (0,1 мкг(мл) при той же чувствительности В — 0,033 мкг/мл при большей чувствительности Г —0,01 мкг/мл при еще более высокой чувствительности. [c.393] Рамановское испускание растворителя, если не принять соответствующих мер, может привести к большим значениям фона в высокочувствительной флуориметрии с фильтрами. Например, для возбуждения часто используется линия ртути 366 нм, выделяемая посредством черного стекла (например, марки han e 0Х9А, срезающего длины волн приблизительно при 405 нм, см. рис. 66). Если в качестве растворителя используется четыреххлористый углерод, достаточно подобрать второй фильтр, не пропускающий света с длинами волн ниже 410 нм. Однако, если растворителем служит вода, главная полоса комбинационного рассеяния появляется при 418 им, и, чтобы избежать высокого фона, необходимо подобрать второй фильтр. [c.394] Бисульфат хинина в 0,1 и. серной кислоте (0,001 мкг/мл) возбуждение линией ртути 366 нм Л —ширина щели 0,25 мм В—ширина щели 1,75 мм и более низкая чувствительность. [c.394] Спектры возбуждения флуоресценции антрацена в циклогексане с наложением спектра комбинационного рассеяния растворителя [73]. [c.395] Возбуждение длиной волны 366 нм Л — чистый растворитель В —0,025 мкг/мл В — 0,05 мкг/мл Г —0,075 мкг/мл. [c.395] Длина волны возбуждения 366 нм. [c.396] Длина волны возбуждения 405 нм Л —без добавления бензоина Б —после добавления бензоина. [c.396] До сих пор мы рассматривали только измерение флуоресценции жидких растворов при комнатной температуре. Гораздо проще обстоит дело с рамановским испусканием в твердых стеклообразных растворах при 77 К. К тому же, поскольку рамановское испускание (точнее следовало бы сказать рамановское рассеяние ) происходит в пределах времени колебания световой волны, оно полностью убирается фосфороскопом и, следовательно, не мещает измерению фосфоресценции или замедленной флуоресценции ни в жидких, ни в твердых средах. [c.396] Спектр чистого циклогексана, возбуждаемый све-ТОМ от небольшого решеточного монохроматора, установленного на 250 нм Л —в кювете из плавленого кварца с фильтрами в пучке возбуждающего света (чувствительность 1000) Б —в кювете из синтетического кварца с фильтрами (чувствительность 1000) В —то же, что и Б, но чувствительность равна 500, чтобы показать интенсивность рамановской полосы Г —в кювете из синтетического кварца без фильтров (чувствительность 1000). [c.397] Особенно серьезны помехи, вызванные фосфоресценцией кюветы (или окружающего пространства) при измерении замедленной флуоресценции (см. раздел III, Н, 8). Здесь фон имеет вид истинного сигнала — спектр идентичен быстрой флуоресценции исследуемого вещества. Однако это не истинная замедленная флуоресценция, а быстрая флуоресценция, возбужденная поглощением фосфоресценции кюветы. [c.398] Наконец, следует упомянуть возможную флуоресценцию оптики перед входной щелью анализирующего монохроматора. Если она изготовлена из плавленого кварца, то последний может давать неприятный фон при возбуждении короткими длинами волн напросвет (см. раздел 111,3,4). При фронтальном и боковом возбуждении этот эффект обычно незначителен. [c.398] Искажения могут возникать даже при полной монохроматичности возбуждающего света в результате неэффективности анализирующего монохроматора. Они особенно ясно выражены при фронтальном освещении, когда сравнительно большая часть возбуждающего света рассеивается образцом и попадает в анализирующий монохроматор. Небольшая часть этого света рассеивается затем оптикой этого монохроматора и в какой-то мере достигает фотоумножителя при установке на любую длину волны. Таким образом, для того чтобы работать с высокой чувствительностью при фронтальном освещении, между образцом и анализирующим монохроматором необходимо поставить фильтр с резкой коротковолновой границей (к тому же нефлуо-ресцируюший) или, что лучше, использовать двойной монохроматор. [c.399] Сложность очистки растворителей от флуоресцирующих и. фосфоресцирующих примесей очень сильно зависит от типа растворителя. Конечно, растворитель необходимо очищать только до такой степени, которая требуется для данного определения, но, поскольку запасы растворителя в лаборатории держат для использования при различных измерениях (часто высокочувствительных), полезно иметь общий критерий высокой чистоты. Хороший метод определения чистоты растворителей, пропускающих ультрафиолетовый свет, состоит в возбуждении светом 250 нм высокой интенсивности от ртутной лампы высокого давления, выделенным посредством монохроматора и фильтров, как это описано для кривой Б на рис. 150. В этих условиях главная рамановская полоса большинства растворителей появляется приблизительно при 270 нм, и спектральная область выще 280 нм будет свободной от помех. Почти все типы флуоресцирующих примесей поглощают при 250 нм и, следовательно. [c.399] Продажный циклогексан высокой чистоты обычно можно использовать без дальнейшей очистки (см. кривую Б на рис., 150). Абсолютный этанол, применяемый в лаборатории, содержит флуоресцирующие примеси в довольно больших концентрациях, но их легко удалить одной перегонкой, как это описано в разделе III, И, 7 (ср. кривые Л и на рис. 151). В своей работе автор встретился с таким фактом, что все порции этанола из одной партии содержали 1—2 ч. антрацена на 10 ч. спирта (см. кривые Л и В на рис. 151), очевидно попавшие при производстве или расфасовке. Такую примесь легко удалить перегонкой, а сам факт приведен здесь для иллюстрации того, какая высокая чувствительность метода может быть достигнута в флуоресцентном анализе при благоприятных условиях. Так как показатель чувствительности флуоресценции антрацена при 250 нм высок, а флуоресценция очищенного этанола незначительна, минимальная обнаружимая концентрация антрацена в спирте составляет меньше 1 ч. на 10 ч. последнего. [c.400] Возбуждение, как и для спектра на рис. 150, с фильтрами (чувствительность 625) Л —этанол без обработки 5 —этанол, очищенный перегонкой В— Очищенный этанол с добавкой антрацена (0,0003 мг/мл). [c.400] Возбуждение, как и для спектра на рис. 150, с фильтрами А — обычная вода чувствительность 2500) 5 — дважды перегнанная вода (чувствительность 2500) В--перегнанная один раз и деионизованная вода (чувствительность 2500) Г —этанол после одной перегонки (чувствительность 2500) Д — то же, что Л, но при чувствительности 625, чтобы показать интенсивность рамановской полосы. [c.401] Этиловый эфир очистить легко, однако для удаления последних следов флуоресценции из парафинов, таких, как изопентан или н-гексан, требуется продолжительная обработка олеумом. Флуоресценция и (или) фосфоресценция растворителя при 77 К обычно значительно больше, чем при комнатной температуре, особенно при возбуждении коротковолновым светом. [c.401] В аналитической спектрофлуориметрии фоторазложение может приводить к двум типам ошибок. Если фоторазложение претерпевает само флуоресцирующее вещество, оно может в значительной степени израсходоваться во время измерения или записи спектра, что приведет к заниженной величине. Второй тип ошибки появляется, когда в результате фотореакции реагента, использованного для получения флуоресцирующего соединения, образуется другой флуоресцирующий продукт. Образование последнего во время измерения спектра вносит вклад в суммарный фон. Рассмотрим теперь, насколько сильно сказываются эти два типа ошибок. [c.406] Вернуться к основной статье